久热国产精品视频一区二区三区,久久精品夜夜春88av,日本片免费观看一区二区,日韩国产小电影在线观看

歡迎進(jìn)入上海聯(lián)祖生物科技有限公司網(wǎng)站!
13482402338
技術(shù)文章

TECHNICAL ARTICLES

當(dāng)前位置:首頁  -  技術(shù)文章  -  帕臘南病毒PCR檢測試劑盒反應(yīng)流程常規(guī)程序

帕臘南病毒PCR檢測試劑盒反應(yīng)流程常規(guī)程序

更新時間:2021-03-31點擊次數(shù):1447

帕臘南病毒PCR檢測試劑盒反應(yīng)流程常規(guī)程序:

將PCR反應(yīng)所需的成分配置完后,在PCR儀上于94-96℃預(yù)加熱幾十秒至幾分鐘,使模板DNA充分變性,然后進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)。在每一個循環(huán)中,先于94℃保持30秒鐘使模板變性,然后將溫度降到復(fù)性溫度(一般50-60℃之間),一般保持30秒鐘,使引物與模板充分退火;在72℃保持1分鐘(擴(kuò)增1kb片段),使引物在模板上延伸,合成DNA,完成一個循環(huán)。重復(fù)這樣的循環(huán)25~35次,使擴(kuò)增的DNA段大量累積。在72℃保持3-7min,使產(chǎn)物延伸完整,4℃保存。

2.復(fù)性(退火)和延伸溫度

復(fù)性的溫度是PCR擴(kuò)增是否順利的關(guān)鍵因素,通常在50-60℃之間。具體的溫度主要由引物的Tm值決定。延伸溫度絕大多數(shù)設(shè)定為72℃。如果復(fù)性的溫度很高,可以將延伸溫度和復(fù)性溫度設(shè)置成同一溫度,變成二步法PCR。

3.反應(yīng)時間

變性步驟一般使用30秒鐘,如果模板的G+C含量較高,或直接用細(xì)胞做模板,變性時間可適當(dāng)延長。復(fù)性時間有30秒種一般是足夠的。延伸時間由擴(kuò)增產(chǎn)物的大小決定,一般采用1kb用1分鐘來保證充足的時間。

4.循環(huán)次數(shù)

循環(huán)次數(shù)主要與模板的起始數(shù)量有關(guān),在模板拷貝數(shù)為104~105數(shù)量級時,循環(huán)數(shù)通常為25~35次。

平臺效應(yīng)(plateaueffect):PCR擴(kuò)增過程后期會出現(xiàn)的產(chǎn)物的積累按減弱的指數(shù)速率增長的現(xiàn)象。原因:底物和引物的濃度已經(jīng)降低,dNTP和DNA聚合酶的穩(wěn)定性或活性降低,產(chǎn)生的焦磷酸會出現(xiàn)末端產(chǎn)物抑制作用,非特異性產(chǎn)物或引物的二聚體出現(xiàn)非特異性競爭作用,擴(kuò)增產(chǎn)物自身復(fù)性,高濃度擴(kuò)增產(chǎn)物變性不*。

5.PCR反應(yīng)液的配制

PCR反應(yīng)體系的配置方式有時也會影響反應(yīng)的正常進(jìn)行。常規(guī)方法與其它酶學(xué)反應(yīng)一樣,在加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒有帶加熱的蓋子,要求在反應(yīng)液上覆蓋一層礦物油,防止水分蒸發(fā)。

對于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時,有時會擴(kuò)增不出產(chǎn)物。在遇到這個問題時,如果將反應(yīng)成分分開配制,A管含模板、引物和dNTP,以及調(diào)整體積的H2O,B管含緩沖液、DNA聚合酶和水,然后再將兩管溶液混合起來,可較好地克服這個問題。

按照常規(guī)的方法配制反應(yīng)體系,有時會出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的問題。熱啟動(hotstart)PCR操作方式可較好解決這一問題。將dNTP、緩沖液,Mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蠟珠(如AmpliWaxPCRQam100),加熱熔化,再冷卻,使蠟將溶液封住,加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)入高溫階段后,蠟層熔化,所有反應(yīng)成分才會混合在一起。

TEL:021-61210612

掃碼加微信

一区二区综合欧美日本中文| 国产精品国产三级国产有无| 非洲大鸡巴在线免费观看| 久久久久久一级毛片高清| 在线一区二区三区观看视频| 久久久久久久日韩韩精品| 国产av精品国语对白国产| 国产精品亚洲精品久久精品| 中文字字幕乱码精品精品| 在线永久看片免费的视频| 国产成人亚洲综合| 久久久久久久久久久久呀| 美女被肏哭视频在线观看| 牛牛在线精品视频(正)| 亚洲欧美日韩久久精品第一区| 蜜桃一区二区三区二百网| 熟女中文字幕一区二区三区| 国产精品亚洲精品久久精品 | 中文 免费 最新 精品| 亚洲熟妇无码av无码| 精品欧美二区三区久久久| 欧美精品一国产成人91| 久久久久久AV无码| 婷婷亚洲综合五月天基地| 久久一区二区av免费观看| 欧美日韩一区高清在线观看| 久久精品国产亚洲AV片| 久久精品国产免费一男女| 国产99视频精品免费视频76| 日韩亚洲AV人人夜夜澡人人爽| 青娱乐AV在线免费观看| 久久精彩视频| 亚洲综合卡通动漫第一页| 亚洲欧美日韩在线一区二区| 亚洲欧美综合另类13p| 人人妻精品一区二区三区| 欧美亚洲俺也去欧美亚洲| 91不卡国产黄色在线播放| 欧美精品九九99久久在免费线| 亚洲亚洲网站三级片在线| 日韩欧美人妻精品一区二区|